实验室核酸气溶胶污染去除剂,避免假阳性问题
关键词:实验室核酸污染 实验室气溶胶污染 实验室核酸清除
新冠疫情以来,各个省市医疗机构大力建造PCR核酸实验室,实验室每天承担着大量繁重的检测任务,同时,困扰实验室核酸污染的问题一直无法规避, 大大增加了检测任务的难度和时效,PCR扩增可以引起实验室中扩增产物的累积,通常一次典型的PCR 扩增可以产生109拷贝的靶序列,如果气溶胶化,甚至最小的气溶胶都会含有106拷贝的扩增产物。如果不加以控制,在短期内累积的气溶胶化的扩增产物即会污染实验室中的试剂、仪器设备和通风系统,从而造成严重的实验室“污染”,出现大量的假阳性结果。
除了规范检测人员的操作流程,将PCR气溶胶污染降低到最低,同时还需要进行操作步骤见的操作规范如下:
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8. 重复实验,验证结果,慎下结论
实验室一旦出现核酸污染,检测应当立刻停止,立刻查找污染源并开始进行核酸清除处理,目前针对实验室常见的核酸清除手段如下:
传统的实验室核酸污染清除方式都存在一定程度的缺陷,而且处理过程人员参与其中,增加二次污染的风险,同时也大大降低了实验检测任务的进行,诺威仕最新推出的气溶胶去除剂NOVOCIDE AIR密闭了核酸清除带来的二次隐患,并充分利用其干雾冷蒸发设备,全智能化对实验室核酸污染进行清除,时间短,效率高。
具备以下特点:
1 、同时对物表及空间气溶胶核酸污染进行全方位清除
2、通常清除时间控制在2小时左右
3、可针对实验室核酸污染预防及核酸污染后的应急处理
4、具备完善的验证方案